International Research Journal of Biological Sciences ___________________________________ ISSN 2278-3202Vol. 2(11), 1-10, November (2013) Int. Res. J. Biological Sci. International Science Congress Association 1 Trichoderma harzianum elicits defense response in Brassica juncea plantlets Nikul Dave, Krima Prajapati, Aarti Patel, Zinal Patel, Durgesh Nandini and Himanshu Bariya* Department of Biotechnology, Hemchandracharya North Gujarat University, Patan-384265, Gujarat, INDIA Department of Biotechnology, Shri A. N. Patel Post Graduate Institute, Anand, Sardar Patel University, Vallabh Vidyanagar, Gujarat, INDIA Available online at: www.isca.in, www.isca.me Received 7th August 2012, revised 2nd February 2013, accepted 13rd August 2013Abstract Indian mustard (Brassica Juncea) is a well-known oil producer with its composition of linoleic Acid, oleic Acid and linolenic Acid. The qualitative and quantitative changes in these fatty acids can be due to infection of pathogen. Presented work summarizes the main findings concerning the Trichodermaplant interaction and its beneficial effect on plant. 30 days old plants were selected for treatment of Trichoderma powder formulation. Quantitative increase in total phenol, total protein and major three fatty acids was found after treatment. Trichoderma also observe to induce resistance capacity of plants. Mustard plant showed induction of jasmonic acid (JA) after treatment. JA was quantified by HPTLC method. The overall plant beneficial effect of Trichoderma as bio-control agent and inducer of defense response were discussed in detail. Keywords: Brassica juncea, defense response, JA, Trichoderma.Introduction Members of the genus Trichoderma (where known, the teleomorphs belong to Hypocrea) are Sordariomycetes, like the model filamentous fungus Neurosporacrassa. Trichodermas variations on the Neurospora themes of morphogenesis and photobiology have been studied for several decades, pointing to those molecular details that are conserved and those that vary between species. A compelling reason to study this group is that several species are promising agents for the biocontrol of plant pathogens. In addition, the non-biocontrol agent Trichoderma reesei is a biotechnological factory for the production of secreted cellulases, and a model for basic studies on protein secretion1,2. Trichoderma harzianum is a fungal genus found in many ecosystems. Some strains have the ability to reduce the severity of plant diseases by inhibiting plant pathogens, mainly in the soil or on plant roots, through their high antagonistic and mycoparasitic potential. The recent comparative genome sequence analysis of two recognized biocontrol species Trichoderma atroviride and Trichoderma virens has afforded us a better understanding of how mycoparasitism arose in a common Trichoderma ancestor as a lifestyle of the genus. The presence of fungal prey and the availability of root-derived nutrients may have been major attractors for the ancestors of Trichoderma to establish themselves in the rhizosphere and to facilitate the evolution of positive interactions with plants. The control of a broad range of plant pathogens, including fungi, oomycetes, bacteria and viral diseases, through elicitation by Trichoderma of ISR or localized resistance has been reported. Some Trichoderma rhizosphere- competent strains have been shown to have direct effects on plants, increasing their growth potential and nutrient uptake, fertilizer use efficiency, percentage and rate of seed germination, and stimulation of plant defences against biotic and abiotic damage. In recent years, an increasing number of studies have contributed to unravelling the molecular basis of the plantTrichodermadialogue and the beneficial effects of Trichoderma to plants. Here in this paper we present in detailed about overall plant beneficial effect of Trichoderma as bio-control agent and inducer of defense response. Material and Methods Isolation of Trichoderma from soil sample: Soil samples were collected from different agriculture soil and rhizosphere of plantation crops located in local region of Patan district of North Gujarat region. Soil samples were kept for shed drying and serial dilution method was applied for isolation of different fungi. Trichoderma species were isolated in specific selective medium. TSMC which contained (gm/lit); MgSO7H O-0.2; KHPO-0.9; KCl-0.15; NHNO -1.0; glucose-3.0, chloramphenicol-0.25, fenaminosulf-0.3, rose Bengal-0.15, pentachloronitrobenzene-0.2, captan-0.02 (post autoclaving), agar-20 as well as in modified TSM containing (gm/lit): Ca(NO -1.0, KNO 0.26, MgSO7HO-0.26, KHPO -0.12, CaCl , 2HO-1.0, citric acid-0.05, sucrose-2.0, agar-20.0, chlortetracycline-0.05, captan (50% wettable powder)-0.04. Identification of Trichoderma species: Another method for identification of Trichodermaharzianumspecies includes DNA isolation and PCR amplification by using species specific primer (OLIGO 631). Fungal DNA isolation: Isolation of fungal genomic DNA was done by growing the fungi for 3-4 days. The mycelia were International Research Journal of Biological Sciences ________________________________________________ ISSN 2278-3202 Vol. 2(11), 1-10, November (2013) Int. Res. J. Biological Sci. International Science Congress Association 2 incubated with lysis buffer containing 250 mMTris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA (pH 8.0), 100 mM NaCl and 2% SDS, for 1 hr at 60C followed by centrifugation at 12,000 rpm for 15 min. The supernatant was then extracted with equal volume of water saturated phenol and further centrifuged at 12,000 rpm for 10 min; the aqueous phase was further extracted with equal volume of phenol: chloroform: isoamyl alcohol (25:24:1) and centrifuge at 12,000 rpm for 15 min; the aqueous phase was then transferred in a fresh tube and the DNA was precipitated with chilled ethanol (100%). DNA was pelleted by centrifuging at 12000 rpm for 15 min and washed in 70% ethanol by centrifugation. The pellets were air dried and suspended in TE buffer (pH 8.0). PCR Amplification by using OLIGO 631 primer: All isolates of Trichoderma were taken up for PCR amplification by using OLIGO-631 primer. Sequence of primer was 5-ATCCGTACGC -3. Genomic DNA was amplified by mixing the template DNA (50 ng), with the polymerase reaction buffer, dNTP mix, OLIGO-631 primer and Taq polymerase. Polymerase Chain Reaction was performed in a total volume of 100 l, containing 78 l deionized water, 10 l 10 X Taq pol buffer, 1 l of 1 U Taq polymerase enzyme, 6 l 2 mMdNTPs, 1.5 l of 100 mM primer and 1 l of 50 ng template DNA. PCR was programmed with an initial denaturing at 94C for 5 min. followed by 30 cycles of denaturation at 94C for 30 sec, annealing at 59C for 30 sec and extension at 70C for 2 min and the final extension at 72C for 7 min in a Primus 96 advanced gradient Thermocycler. PCR product (20 l) was mixed with loading buffer (8 1) containing 0.25% bromophenol blue, 40 % w/v sucrose in water and then loaded in 2% Agarose gel with 0.1 % ethidium bromide for examination with horizontal electrophoresis. Morphological study: Morphological observations were made to the isolates used for study to confirm the species, which included colony growth rate, colony characters, color of the surface and reverse of the colony, texture of conidiation, conidiophore branching and texture. Mass production of Trichoderma and formation of powder formulation: Isolated Trichodermaharzianumwas grown in autoclaved sorghum grains followed by incubation at 28C f6r 5-7 days in dark. Outer layer of sorghum grain were covered by fungal spore. Mix this grain in 1 kg of powder thoroughly and count total CFU from powder. 1 kg powder which now containing Trichoderma spore were packed in commercial box. This powder was further use for Trichoderma plant interaction study. Experimental plants: For Trichoderma plant interaction, Brassica juncea plants were used. Mustard plants were grown in plastic pots. Pots divided in four sets and each set contain five pots with 10 plants. Each set were treated with specific treatment as shown in table 1. Table-1 Experimental design showing distribution of plants for different treatment Set No. of pots Treatment Set-1 5 Control Set-2 5 Infection Set-3 5 Infection + powder Set-4 5 Powder Infection was made by using spore and mycelium suspension of Sclerotium rolfsii, a causative agent of southern blight in mustard. 5 grams of Trichoderma powder was used for treatment. Analysis of different parameter in treated plant: Different parameter was analyzed in plant after treatment with Trichoderma and pathogen. Parameter include, total phenol, protein quantification of profiling by native and SDS PAGE, Lipid quantification, JA measurement and lipoxigenase enzyme activity. Estimation of total phenol: Estimation of total phenols and phenolics Plant phenols were extracted and purified by the method of Andersen and Pedersen. The extract was suspended in acetone and made up to 10 ml with distilled water. Total phenols were estimated using the method of Malickand Singh10 and expressed as mg phenols (in terms of catechol) per 1 g fresh tissue. Estimation of total protein and protein profiling: Tris- HCl (0.05 m, pH 7.4) was added at 5 ml per gram of leaves for extraction. The homogenate was centrifuged at 8000 g for 20 min at 48C (Sigma 3K30 centrifuge). The clear supernatant was collected for total protein estimation by folin-lawry method11 and polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Native and SDS PAGE with 10% resolving gel was carried out at 30 mA current for 2-3 h until the dye front moved to the bottom of the gel. After turning off the power supply, the gel was carefully taken out and stained using Commasive Brilient Blue (CBB). Immediately after resolution of bands, gel was recorded photographically. Estimation of total lipid: 1.0 g of fresh tissue was weighted and grinded in a mortar with about 10ml of solvent mixture [Ethanol: Ethyl ether (1:3, v/v)]. Then it was centrifuged at 2000 rpm for 10min and clean extract was transferred into a new tube. 2ml of 0.05M KCL solution was added to the extract and mixed. Two layers were separated and then carefully below layer was taken out at which lipid was present. Thin Layer Chromatography of lipids was performed with the solvent system made up of Hexane: Ethyl ether: glacial acetic acid (80:20:1 V/V) and the results were observed after spraying the 50% HSO and heating at the 110C temperature for 10 minutes. Preparative TLC was performed for lipid profiling. Jasmonic acid measurement: Methanolic extract of 1.0 gram of chopped leaves of treated mustard plant was prepared and International Research Journal of Biological Sciences ________________________________________________ ISSN 2278-3202 Vol. 2(11), 1-10, November (2013) Int. Res. J. Biological Sci. International Science Congress Association 3 concentrated extract was applied on HPTLC plate by using automatic applicator (Linomate 5). After loading sample, plate was allowed to run in mobile phase. Plate was observed under UV and Rf value were calculated for each separated bands and JA band was compared with standard JA run along with samples. JA quantification was made by densitometry analysis by camag analyzer. Band density was compared with standard band density12. Results and DiscussionIdentification of Trichoderma harzianum and its powder formulation: Trichoderma harzianum was isolated from agricultural soil and identified by species specific primer amplification. OLIGO-631 primer used for PCR amplification and it showed 1.6 kb size band amplification in only one strain. Amplification of 1.6 kb band confirm for Trichoderma harzianum. In other DNA sample, 1.6 kb band was not amplified but small fragments were amplified as shown in figure 1. After confirmation by PCR amplification, this fungus were further analyzed by it morphological observations made by using microscope. Mycelia were smooth surfaced, watery white and sparse but soon developed aerial hyphae on their surface. The color of the colony changed from whitish green with the development of conidia. The reverse of the colony remained uncolored (figure 2).The conidiophores were much branched, formed loose tufts, the main branches were mostly in groups of 2-3 and stood at right angle to the bearer and their length increased with the distance from the tip of the main branch which gave a conical or pyramidal appearance (figure 2). Sorghum grains now covered with spores of Trichoderma were mixed with talk and powder was thoroughly mixed. Total CFU count in newly formed powder was approximate 1 X 10-4 CFU / gram, which confirmed by plate method. Each 1 kg powder contains 0.5 % of Trichoderma spores and remaining was powder. 5 gram of this powder was used as further treatment to mustard plants. Analysis of different parameters: Total phenol induction: Total phenol was measured in treated mustard plants as well as control plants. When plants were treated with pathogen and pathogen + powder, phenol level was increasing up to 1 week, afterward level become decrease gradually. Plants treated only with powder also showed same pattern of inductionup to 8 g/ml. Our findings showed that, when plants were exposed to only pathogen level of phenol was very high at initial level i.e. 7 dyas, but plants treated with pathogen + powder level of phenol remain enough high up to 3 weeks after treatment and level was 5-13 g/ml. These results suggest long term effect of powder treatment (figure 3). Total protein and its profiling: Like phenol, protein was also increasing in whole course of study. Plants treated with pathogen showed initial increase in total protein level up to 100 g/ml and then decrease and reach up to control level of 80 g/ml. Plants treated with powder and pathogen + powder showed higher induction of proteins up to 168 g/ml after 14 days and it remain increase up to 2 weeks after treatment. Control plant showed protein level from 78 to 84 g/ml. only powder treatment to plant also showed induced level from 115 to 185 g/ml during 3 weeks (figure 4). Native PAGE showed higher molecular weight proteins in all treated samples. Density of protein bands was higher in pathogen + powder treated plants compared to pathogen treated plant. Powder treated plant showed similar profile than that of pathogen treated plant after 14 days compared to 7 days.In pathogen + powder treated plants after 14 days protein bands ranged from 30 kd to 100 kd were highly induced compared to 7 days sample as shown in figure 5. SDS PAGE showed higher as well as lower molecular weight proteins in all treated samples. Density of protein bands was higher in pathogen + powder treated plants compared to pathogen treated plant. Powder treated plant showed similar profile than that of pathogen treated plant after 14 days compared to 7 days. In pathogen + powder treated plants after 14 days protein bands ranged from 10 kd to 100 kd were highly induced compared to 7 days sample as shown in figure 6. Lipid content and profiling: When mustard plats treated with pathogen total lipid level slightly increase but when plant treated with pathogen and pathogen + powder higher increasing in lipid level was observed. Powder alone not significantly increases lipid level but along with pathogen it significantly induces lipid level. Control plant showed 10 to 12 mg/GFW lipid level. Pathogen and powder treated plants showed induced level of lipid from 20 to 24 mg/GFW, which is two time higher than control plants. When plants treated with pathogen + powder it showed very high induction of lipid from 30 to 40 gm/GFW up to 3 weeks (table 2). Table-2 Lipid quantification in all treated mustard plants, Value is expressed in milligram per gram of fresh tissue Days Treatment control Pathogen treated Powder treated Powder + Pathogen treated 7 days 10.34 0.2 20.37 0.3 20.42 0.2 30.27 0.4 14 days 11.45 0.06 24.62 0.2 21.40 0.3 38.46 0.2 21 days 10.36 0.1 22.67 0.3 22.50 0.4 40.26 0.5 28 days 11.35 0.3 23.36 0.1 21.12 0.5 35.25 0.2 International Research Journal of Biological Sciences ________________________________________________ ISSN 2278-3202 Vol. 2(11), 1-10, November (2013) Int. Res. J. Biological Sci. International Science Congress Association 4 Figure-1 PCR amplification of DNA of seven different Trichoderma isolates by using OLIGO-631 primer, Only 1TR isolate showed 1.6 kb fragment amplification and confirmed as T. harzianum. M: 1.0 Kb DNA ladder, other are different isolates Figure-2 Conidiophore structure in different isolates, All observation was done under compound microscope by using 100 X lense International Research Journal of Biological Sciences ________________________________________________ ISSN 2278-3202 Vol. 2(11), 1-10, November (2013) Int. Res. J. Biological Sci. International Science Congress Association 5 &#x/Pre; ict;&#xor 1; /C;&#xolum;&#xns 1;Ÿ ;&#x/Col;&#xors ; &#x/Pre; ict;&#xor 1; /C;&#xolum;&#xns 1;Ÿ ;&#x/Col;&#xors ; E E__PPGYR&#x/Pre; ict;&#xor 1; /C;&#xolum;&#xns 1;Ÿ ;&#x/Col;&#xors ; &#x/Pre; ict;&#xor 1; /C;&#xolum;&#xns 1;Ÿ ;&#x/Col;&#xors ; ����a7Jͩ9hYaVPXe֒,1&HYf.$4a $OѾx{&#x==-;|u;&#xu5++;&#x F;&#x;&#x::;&#x: sa; &#xWho;&#xoG; ``;&#x;&#xUzu;&#xu;&#x;&#x3==;&#x;&#x; KK ;&#x; W;&#xh00;&#x/Pre; ict;&#xor 1; /C;&#xolum;&#xns 1;Ÿ ;&#x/Col;&#xors ; &#x/Pre; ict;&#xor 1; /C;&#xolum;&#xns 1;Ÿ ;&#x/Col;&#xors ; [Jy$_&#x/Pre; ict;&#xor 1; /C;&#xolum;&#xns 1;Ÿ ;&#x/Col;&#xors ; :z}kkͷ镕=1!!w|~~NKKmjjؘ;::`nn&#x/Pre; ict;&#xor 1; /C;&#xolum;&#xns 1;Ÿ ;&#x/Col;&#xors ; &#x/Pre; ict;&#xor 1; /C;&#xolum;&#xns 1;Ÿ ;&#x/Col;&#xors ; &Sɥ,r|;E&#xg;&#xy;&#xs;&#x;&#xή;෮GGK;_;&#xS; &#x//;&#xl[[;&#x[s;&#x;̈́&#x];&#xPPPX;&#xX811;Ŧ;&#xn0;&#x;&#x;88;&#xtrr;&#x;&#x;&#xR;&#x; &#xtt40;|;E&#xg;&#xy;&#xs;&#x;&#xή;෮GGK;_;&#xS; &#x//;&#xl[[;&#x[s;&#x;̈́&#x];&#xPPPX;&#xX811;Ŧ;&#xn0;&#x;&#x;88;&#xtrr;&#x;&#x;&#xR;&#x; 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Phenol level is expressed in terms of g/ml. catachole used as standard. IPJ: pathogen + powder treatment ; PJ: powder treatment ; IJ: pathogen treatment and CJ: control plant Figure-4 Total protein induction in treated as well as control platns. Phenol level is expressed in terms of g/ml. catachole used as standard. IPP: pathogen + powder treatment ; PP: powder treatment ; IP: pathogen treatment and CP: control plant International Research Journal of Biological Sciences ________________________________________________ ISSN 2278-3202 Vol. 2(11), 1-10, November (2013) Int. Res. J. Biological Sci. International Science Congress Association 6 Figure-5 Native gel electrophoresis of proteins from treated mustard plants. Mainly higher molecular weight proteins were observed. 1: Pathogen infected plant (7 days); 2: Powder treated plant (7 days); 3: pathogen + powder treated plants (7 days); 4: Pathogen infected plant (14 days); 5: Powder treated plant (14 days); 6: pathogen + powder treated plants (14 days); M: Molecular weight marker Figure-6 SDS gel electrophoresis of proteins from treated mustard plants. Mainly higher molecular weight proteins were observed. 1: Pathogen infected plant (7 days); 2: Powder treated plant (7 days); 3: pathogen + powder treated plants (7 days); 4: Pathogen infected plant (14 days); 5: Powder treated plant (14 days); 6: pathogen + powder treated plants (14 days); M: Molecular weight marker Lipid profile was done by using preparative TLC method. After separation it was observed that several different types of lipid components were separated according to their respective Rvalue. Two fatty acids, linoleic acid and oleic acid, were identified in all samples. Plant treated with pathogen did not show induction of linoleic and oleic acid. Powder treated and pathogen + powder treated plants showed induction of both fatty acid and other lipids also as shown in figure. Induction of these two fatty acids was almost similar at 7 days and 14 days. Control plant showed very less induction of lipids or fatty acids (figure 7). Jasmonic acid estimation: Jasmonic acid (JA) is very important signaling molecules in plant defense mechanism. In powder treated sample JA level no significant induction was found. Plants treated with pathogen + powder showed very high induction of JA and was very significance lasting up to 3 weeks. Control plant showed 48 g /GFW of JA level. Treatment of plants with powder resulted in induction of JA up to 180 g /GFW. Plant treated with pathogen showed almost similar induction as showed by powder treatment. Pathogen + powder treatment prove very significant in JA induction up to 300 g /GFW during 2-3 weeks after treatment (figure 8). International Research Journal of Biological Sciences ________________________________________________ ISSN 2278-3202 Vol. 2(11), 1-10, November (2013) Int. Res. J. Biological Sci. International Science Congress Association 7 Figure-7 Lipid profiling of all treated as well as control mustard plants of 7 days and 14 days after treatment. Two fatty acids were identified as shown by arrow. 1: powder treated plant (7 days); 2: powder treated plant (14 days); 3: pathogen treated plants (7 days); 4: Pathogen treated plant (14 days); 5: Pathogen + powder treated plant (7 days); 6: Pathogen + powder treated plants (14 days); 7: Untreated plants (control) Figure-8 Jasmonic acid quantification in all treated mustard plants by using HPTLC. Quantity of JA is expressed as g / GFWDiscussion: Trichoderma species are fast growing filamentous deuteromycetes widely distributed around the world13. They are found in most soils and are frequently the dominant component of the soil microflora. Among the different orders of the Deuteromycotina, Trichoderma species belong to the moniliales. A revised classification of the genus Trichodermawas proposed by Bissett14 in 1991 based on key morphological characteristics. Several papers were reported worldwide and all address the Trichodermaplant interaction15,16. The work of 30 years of strain improvement, as part of the history of utilization of Trichoderma in cellulose degradation for this purpose and for the production of heterologous proteins1, 2. A series of studies has reported the use of high-throughput sequencing in gene expression analysis leading to the discovery of genes controlling asexual reproduction in response to different environmental cuesand of genes involved in the Trichodermahost interaction. Lysis of the preys cell wall is one of the key steps during mycoparasitism. The genome analysis of two mycoparasiticTrichoderma species, T. atroviride and T. virens, revealed an expanded arsenal of genes encoding enzymes potentially involved in cell wall hydrolysis. It has always been International Research Journal of Biological Sciences ________________________________________________ ISSN 2278-3202 Vol. 2(11), 1-10, November (2013) Int. Res. J. Biological Sci. International Science Congress Association 8 puzzling how Trichoderma differentiates between self and non-self fungal cell wall degradation. Mukherjee et al.17 review the genes which determine the secondary metabolite repertoire of Trichoderma, including both useful and toxic compounds, known and novel. Polyketide synthases and non-ribosomal peptide synthases (NRPSs) define two major classes of secondary metabolites18,19. Peptaibols (made by NRPSs) belong to the antifungal arsenal of Trichoderma, and have now been found to trigger apoptotic death of the host. Here in this paper we prepared a one powder formulation by very economic method and use this powder for treatment to mustard plants. Different parameters were measured after treatment of powder. We found that trichioderma powder induce defense repose in mustard plants up to 3 weeks. Treatment of Trichoderma induces phenolic level in mustard plants. Pathogen treated and powder + pathogen treated plants also showed induction of phenol. Initially level of phenol was high on 7 days but after that it gradually decrease. In many reports it was observed that induction of phenol in plant is a primary level of defense and it reach up to its optimum level within 2 days20. Here we collect leaves for analysis was after 7 days, 14 days, so may be chances of decrease in phenol level after treatment. In case of pathogen + powder treatment phenol level was remain high up to 3 weeks. Induction of protein was also observed after Trichodermatreatment in mustard plants. Powder along with pathogen treatment showed high induction of total protein. Induction of protein after infection and elicitor treatment was reported by many researchers worldwide20,21,22. Powder treatment to mustard plant proves significant for induction of protein and native PAGE and SDS PAGE also carried out for further confirmation. Result of PAGE showed different protein expression in treated plants and it include PR protein expression after treatment. The nearby same result reported by Sriram et al.23while studying the potential use of elicitors from Trichoderma in induced systemic resistance for the management of Phytophthora capsici in red pepper. Lipid is a most important constituent in mustard plant and it affects the economic value of oil seeds. Induction of lipid upon infection was reported by many other researchers worldwide. On our result it was observed that powder treatment and powder + pathogen treated plant showed induced level of lipid in mustard plants. Lipid profiling suggested that two fatty acids induced greatly after treatment. Induction of linoleic and oleic acid leads to JA induction and this was reported by Dhandhukia and Thakkar12. Jasmonic acid (JA) is very important signaling molecules in plant defense mechanism. Trichoderma is able to trigger a long-lasting up-regulation of SA gene markers in plants unchallenged by pathogens, although when plants are infected by a pathogen such as B. cinerea, the pretreatment with Trichoderma may modulate the SA-dependent gene expression and, soon after infection, the expression of defense genes induced through the JA signal transduction pathway occurs, causing ISR to increase over time. In this paper we also found that upon treatment JA was induced in mustard plants. High induction of JA was observed in powder + pathogen treatment. It was observed that Trichoderma in form of powder induced plant defense in terms of induction of phenol, protein, lipids and signaling molecule JA. Trichoderma had received little attention as a potential inducer of plant resistance until the publication of studies describing that bean root colonization by T. harzianumwas effective in inducing defence responses and that penetration of T. asperellum in the root system triggered ISR in cucumber seedlings24. As a consequence of Trichoderma root colonization and MAMP interaction the proteome and transcriptome of plant leaves are systemically affected. The ISR triggered by Trichoderma occurs through the JA/ET signalling pathway similarly to PGPRISR25, as confirmed by several authors: i. cerato-platanin Sm1 is required for T. virens-mediated ISR against Colletotrichumgraminicola in maize26, ii. Trichodermatreatment of JA/ET-deficient Arabidopsis genotypes leads to enhanced susceptibility to Botrytis cinerea, iii. ISR triggered by PGPR and Trichoderma converges upstream from MYB72, an early key component of the onset of ISR. However, other studies have shown that in the T. asperellumcucumber interaction the induction of plant responses is a time- and concentration-dependent phenomenon, and in the first hours of contact a SARlike response is observed, with an increase in SA and peroxidase activity. In fact, a systemic increase in SA and JA levels was observed after inoculation of high densities of Trichoderma. Gallouet al.27 also observed that the defence response of T. harzianumchallenged potato to Rhizoctoniasolaniwas dependent on JA/ET and SA. Finally Trichoderma genomes have revealed mycotrophy and mycoparasitism as ancestral lifestyles of species of this genus. Some Trichoderma strains have become established in the plant rhizosphere and evolved as intercellular root colonizers. As a result, they stimulate plant growth and defenses against pathogens. Like other beneficial microbes, Trichoderma elicits ISR by JA/ET-dependent pathways and triggers priming responses in the plant. However, the Trichodermaplant cross-talk is dynamic and the expression of defense-related genes and its product of the JA/ET and/or SA pathways may overlap, depending on the Trichoderma strains and the concentrations used, the plant material, the developmental stage of the plant, and the timing of the interaction. The expression of Trichoderma genes in plants has beneficial results, mainly in the control of plant diseases and resistance to adverse environmental conditions. The experimental evidence reviewed here indicates that Trichodermaplant interactions have features in common with other beneficial microbe associations but that they also display their own characteristics due to Trichodermas particular lifestyle. International Research Journal of Biological Sciences ________________________________________________ ISSN 2278-3202 Vol. 2(11), 1-10, November (2013) Int. Res. J. Biological Sci. International Science Congress Association 9 Nevertheless, there is a need for more studies aimed at gaining insight into the signaling transduction pathways, related to defense and development, resulting from Trichodermaplant interactions in the presence of pathogens and/or different types of abiotic stress. Conclusion Trichoderma genomes have revealed mycotrophy and mycoparasitism as ancestral lifestyles of species of this genus. Some Trichoderma strains have become established in the plant rhizosphere and evolved as intercellular root colonizers. As a result, they stimulate plant growth and defenses against pathogens. Like other beneficial microbes, Trichoderma elicits ISR by JA/ET-dependent pathways and triggers priming responses in the plant. However, the Trichodermaplant cross-talk is dynamic and the expression of defense-related genes and its product of the JA/ET and/or SA pathways may overlap, depending on the Trichoderma strains and the concentrations used, the plant material, the developmental stage of the plant, and the timing of the interaction. The expression of Trichoderma genes in plants has beneficial results, mainly in the control of plant diseases and resistance to adverse environmental conditions. The experimental evidence reviewed here indicates that Trichodermaplant interactions have features in common with other beneficial microbe associations but that they also display their own characteristics due to Trichodermas particular lifestyle. Nevertheless, there is a need for more studies aimed at gaining insight into the signaling transduction pathways, related to defense and development, resulting from Trichodermaplant interactions in the presence of pathogens and/or different types of abiotic stress. 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